ChưƠng : huyết học tế BÀO (cell-hematology) TÌm ký sinh trùng sốt réT 1


CHƯƠNG 3: MIỄN DỊCH-DI TRUYỀN-SINH HỌC PHÂN TỬ



tải về 0.79 Mb.
trang7/9
Chuyển đổi dữ liệu01.12.2017
Kích0.79 Mb.
#3505
1   2   3   4   5   6   7   8   9

CHƯƠNG 3:

MIỄN DỊCH-DI TRUYỀN-SINH HỌC PHÂN TỬ

(DÀNH CHO CHUYÊN NGÀNH HUYẾT HỌC-TRUYỀN MÁU)

NHUỘM BĂNG G NHIỄM SẮC THỂ G-BAND STAINING



I. NGUYÊN LÝ

Kỹ thuật nhuộm băng G được sử dụng để nhuộm nhiễm sắc thể ở kỳ giữa. Nhiễm sắc thể (nhiễm sắc thể) ở kỳ giữa được xử lý bằng enzym phân giải protein và được nhuộm với Giemsa. Băng tối là đoạn ADN giàu A, T (ngược lại với băng R), băng sáng là những đoạn giàu G, C. Phương pháp được sử dụng để nhận dạng các nhiễm sắc thể và phát hiện bất thường nhiễm sắc thể, dựa vào đặc điểm các băng sáng tối trên mỗi nhiễm sắc thể.



II. CHỈ ĐỊNH

Kỹ thuật này được sử dụng trong xét nghiệm công thức nhiễm sắc thể máu ngoại vi/tủy xương được để nhận diện bất thường nhiễm sắc thể..



III. CHỐNG CHỈ ĐỊNH

Không có chống chỉ định.



IV. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện

Kỹ thuật viên xét nghiệm di truyền đã được đào tạo.



2. Phương tiện - Hóa chất

2.1. Phương tiện

- 02 cóng Coplin jar;

- 03 cốc thủy tinh 100ml;

- 01 cặp không mấu.



2.2. Hóa chất

- Enzym phân giải protein (trypsin);

- Đệm pH 6,8 (KH2PO4: 9,1g/l; Na2HPO4.2H2O: 11,5g/l);

- Chất ức chế enzym (huyết thanh bào thai bê - FBS);

- Nước muối 9‰.

3. Bệnh phẩm

Tiêu bản nhiễm sắc thể kì giữa đã được sấy khô (theo quy trình “Xét nghiệm công thức Nhiễm sắc thể”).



V. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

1. Chuẩn bị

1.1. Chuẩn bị tiêu bản

Tiêu bản sau khi thu hoạch được cho vào tủ sấy 50-60oC 24 giờ, hoặc để khô tự nhiên 3 ngày trở lên.



1.2. Chuẩn bị hóa chất

- Cốc 1: Pha 0.05g trypsin bột vào 50ml nước muối 0.9‰;

- Cốc 2: Pha 100ml FBS 2%;

- Cốc 3: Nước muối 9‰;

- Cốc 4: Nước muối 9‰;

- Cốc 5: Pha Giêmsa 10% trong đệm pH 6,8;

- Cốc 6: Đệm pH 6,8.

2. Tiến hành kỹ thuật

- Nhúng tiêu bản trong cốc 1 từ 1-2 phút;

- Chuyển sang cốc 2/30 giây;

- Chuyển sang cốc 3/15 giây;

- Chuyển sang cốc 4/15 giây;

- Chuyển sang cốc 5/10 phút;

- Chuyển sang cốc 6/15 giây;

- Rửa dưới vòi nước chảy



VI. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Tiêu bản sau khi nhuộm băng G được phân tích bất thường về số lượng, cấu trúc trên kính hiển vi ở độ phóng đại 1.000 lần và được phân tích bằng phần mềm chuyên dụng.



VII. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Vấn đề

Nguyên nhân

Xử trí

Băng không cắt (Không

hình thành các băng nhạt)



Để thời gian cắt của enzym không đủ.

Để thêm thời gian cắt của enzym.

Băng bị cắt quá (nhiễm sắc thể quá nhạt màu, không rõ các băng đậm màu)

Để thời gian cắt của enzym dài quá, dung dịch pha enzym phân giải không đúng.

Điều chỉnh lại thời gian cắt của enzym cho hợp lý.

Pha lại enzym nếu nhầm dung dịch đệm.




CHƯƠNG 4: TRUYỀN MÁU (BLOOD TRANSFUTION)

XÉT NGHIỆM HÒA HỢP MIỄN DỊCH PHÁT MÁU Ở 22oC

(Kỹ thuật gelcard/Scangel)



I. NGUYÊN LÝ

Xét nghiệm hòa hợp miễn dịch phát máu ở 22oC có nguyên lý của phản ứng ngưng kết và được sử dụng để phát hiện các kháng thể có trong huyết thanh của người nhận hoặc người cho mà các kháng thể này có khả năng gây ngưng kết trực tiếp hồng cầu của người cho hoặc người nhận trong môi trường nước muối ở 22oC và gây tan máu trong lòng mạch 1, 2, 3.



II. CHỈ ĐỊNH

Xét nghiệm hòa hợp miễn dịch phát máu ở 22oC được chỉ định trong những trường hợp sau:

- Truyền máu toàn phần, khối hồng cầu còn nhiều huyết tương, khối bạch cầu;

- Truyền khối hồng cầu còn ít hoặc không còn huyết tương;

- Truyền chế phẩm tiểu cầu, huyết tương.



III. CHỐNG CHỈ ĐỊNH

Không có chống chỉ định.



IV. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện

Bác sĩ, cử nhân, kỹ thuật viên, điều dưỡng trung học.



2. Phương tiện - Hóa chất

2.1. Trang thiết bị

Máy ủ gelcard chuyên dụng; Máy ly tâm gelcard chuyên dụng; Máy ly tâm ống thẳng có số vòng và thời gian chính xác để ly tâm ống máu; Tủ lạnh đựng sinh phẩm…



2.2. Dụng cụ

Ống nghiệm thủy tinh: 12x75mm; Giá cắm ống nghiệm; Khay men hình chữ nhật: 25x30 cm; Bút marker; Pipet nhựa; Pipet tự động; Đầu côn các loại; Hộp đựng đầu côn; Giá đỡ gelcard.



2.3. Thuốc thử và hóa chất

 Dung dịch Liss; Nước muối sinh lý 0,9%; Nước cất.

 Tấm gelcard nước muối.

2.4. Mẫu máu để làm phản ứng hòa hợp

Gồm một ống máu tĩnh mạch đã được chống đông bằng EDTA: 2 ml.



2.5. Vật tư tiêu hao

Sổ ghi kết quả; Phiếu xét nghiệm định nhóm máu; Mũ giấy; Khẩu trang; Găng tay; Quần áo công tác.



3. Thời gian làm xét nghiệm: 60 phút

V. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

1. Nhận mẫu máu và phiếu yêu cầu truyền máu, chế phẩm, kiểm tra và đối chiếu các thông tin trên mẫu máu và phiếu yêu cầu truyền máu. Kiểm tra về số lượng và chất lượng mẫu máu.

2. Chuẩn bị dụng cụ, hóa chất, sinh phẩm, trang thiết bị trước khi làm xét nghiệm.

3. Tiến hành kỹ thuật [4]

- Bước 1: Mang dung dịch LISS được bảo quản trong tủ lạnh về nhiệt độ phòng trước khi sử dụng;

- Bước 2: Chuẩn bị hồng cầu người cho và/hoặc người nhận 0,8% (10 µl hồng cầu khối và 1ml dung dịch LISS), dịch treo hồng cầu sau khi pha phải được sử dụng để làm xét nghiệm ngay; Ly tâm ống máu không chống đông để tách huyết thanh;

- Bước 3: Ghi nhãn vào vị trí từng cột gel trên tấm gelcard họ và tên người nhận, mã số (nếu có), số giường, khoa, phòng… và mã số, thành phần của đơn vị máu, chế phẩm.

- Bước 4: Mở tấm bảo vệ phủ trên cột gel theo đúng quy định;

- Bước 5: Nhỏ 50 µl dung dịch hồng cầu 0,8% của người cho đã được chuẩn bị ở trên vào các cột gel thích hợp đã được ghi nhãn;

- Bước 6: Thêm 25 µl huyết thanh hoặc huyết tương của người bệnh và người cho vào các cột gel tương ứng;

- Bước 7: Ủ tấm gelcard trên 15 phút ở nhiệt độ phòng;

- Bước 8: Sau ủ, ly tâm 10 phút ở máy ly tâm gelcard chuyên dụng;

- Bước 9: Lấy gelcard ra khỏi máy ly tâm;

- Bước 10: Đọc kết quả trên máy đọc gelcard và lưu giữ kết quả bằng phần mềm máy tính;

VI. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

1. Kết quả xét nghiệm hòa hợp phát máu ở 22oC âm tính

Máu của người cho và người bệnh là hòa hợp; Kết hợp với kết quả xác định nhóm hệ ABO, Rh D và kết quả xét nghiệm hòa hợp miễn dịch phát máu có sử dụng kháng globulin người để quyết định phát máu và chế phẩm cho các khoa lâm sàng để truyền cho người bệnh.



2. Kết quả xét nghiệm hòa hợp phát máu ở 22oC dương tính

Máu của người cho và người bệnh là không hòa hợp; Lặp lại xét nghiệm với một đơn vị máu khác và kết hợp với kết quả xác định nhóm hệ ABO, Rh D và kết quả xét nghiệm hòa hợp miễn dịch phát máu có sử dụng kháng globulin người để quyết định có hoặc không phát máu và chế phẩm cho các khoa lâm sàng để truyền cho người bệnh.



Những điểm cần chú ý khi làm xét nghiệm

- Thực hiện kiểm chứng theo quy định của thông tư 26/2013/TT-BYT về Hướng dẫn hoạt động truyền máu [5].

- Đọc kỹ và tuân thủ đúng các bước tiến hành kỹ thuật theo hướng dẫn của nhà sản xuất sinh phẩm mà hiện đơn vị đang sử dụng;


Каталог: DownLoad
DownLoad -> Người lính bộ đội Cụ Hồ
DownLoad -> Truyện Tiểu thuyết
DownLoad -> TrưỜng thcs tiến dũng báo cáo tự ÐÁnh giá
DownLoad -> I. Tìm hiểu chung
DownLoad -> Nhiễm trùng đường tiểu là gì?
DownLoad -> Sốt là gì? Sốt là khi thân nhiệt của con quý vị cao hơn bình thường. Thân nhiệt bình thường là khoảng 37º Celsius, nhưng nhiệt độ này có thể thay đổi trong ngày. Ở trẻ em, nhiệt độ trên 38ºC cho biết là có sốt
DownLoad -> Đau bụng là gì? Đau bụng (đau dạ dày) xảy ra ở giữa phần cuối của xương sườn và khung xương chậu của quý vị. Khu vực này, nghĩa là bụng, chứa đựng nhiều bộ phận, bao gồm dạ dày, gan, lá lách
DownLoad -> Giới thiệu sách mới tháng 10/2012
DownLoad -> Chỉ thị Về công tác phòng, chống lụt, bão, thiên tai

tải về 0.79 Mb.

Chia sẻ với bạn bè của bạn:
1   2   3   4   5   6   7   8   9




Cơ sở dữ liệu được bảo vệ bởi bản quyền ©tieuluan.info 2022
được sử dụng cho việc quản lý

    Quê hương